温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠N6⁃甲基腺苷甲基化的影响
Effects of Wenhua Juanbi Recipe on m6A methylation in collagen⁃induced arthritis rats
- 上海中医药杂志 2022年56卷第10期 页码：65-70
- 作者机构：
1.扬州市中医院（江苏 扬州 225127）
2.浙江中医药大学第二临床医学院（浙江 杭州 310053）
3.浙江中西医结合医院中医科（浙江 杭州 310003）
- 作者简介：
周海丽，女，博士，主要从事中西医结合诊治风湿病的临床及基础研究工作
刘喜德，主任医师，博士研究生导师； E-mail：liuxide2001@163.com
- 基金信息：浙江省自然科学基金项目(LY21H270001);浙江省中医药科技计划项目(2020ZB180);杭州市卫生科技计划重大项目(Z20200026)
DOI：10.16305/j.1007-1334.2022.2205023
中图分类号：
扫 描 看 全 文
周海丽,黄柳云,刘喜德.温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠N6⁃甲基腺苷甲基化的影响[J].上海中医药杂志,2022,56(10):65-70.
ZHOU Haili,HUANG Liuyun,LIU Xide.Effects of Wenhua Juanbi Recipe on m6A methylation in collagen⁃induced arthritis rats[J].Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine,2022,56(10):65-70.
周海丽,黄柳云,刘喜德.温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠N6⁃甲基腺苷甲基化的影响[J].上海中医药杂志,2022,56(10):65-70. DOI： 10.16305/j.1007-1334.2022.2205023.
ZHOU Haili,HUANG Liuyun,LIU Xide.Effects of Wenhua Juanbi Recipe on m6A methylation in collagen⁃induced arthritis rats[J].Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine,2022,56(10):65-70. DOI： 10.16305/j.1007-1334.2022.2205023.
摘要
目的,2,研究温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠炎症及N6-甲基腺苷（m6A）甲基化的影响。,方法,2,选用雌性Wistar大鼠50只，随机分为正常组（,n,=10）和造模组（,n,=40）。采用尾部皮内多点注射乳化剂的方法建立CIA模型。采用容积法（排水体积）和关节炎指数（AI）评分法对模型进行评估，足肿胀体积,>,1.6 mL、AI评分≥4分视为造模成功。将造模成功的30只CIA大鼠随机分为模型组（,n,=10）、温化蠲痹方组（中药组，,n,=10）、甲氨蝶呤（MTX）组（,n,=10）。中药组给予温化蠲痹方，剂量为22.9 g·kg,-1,·d,-1 ,；MTX组给予甲氨蝶呤混悬液，剂量为0.78 mg·kg,-1,，每周1次；正常组和模型组给予等量质量分数为0.9%的氯化钠溶液，每日1次。治疗30 d取各组大鼠膝关节滑膜。采用HE染色法检测滑膜病理情况，以realtime PCR法检测滑膜中甲基转移酶样蛋白3（,Mettl3,）、甲基转移酶样蛋白14（,Mettl14,）、肥胖相关蛋白（,Fto,）、Alkb同系物5（,Alkbh5,）、Yth N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1（,Ythdf1,）、Yth N6-甲基腺苷RNA结合蛋白2（,Ythdf2,）基因表达及关节炎性因子肿瘤坏死因子-,α,（,TNF,-,α,）、白介素-1β（,IL,-,1β,）、白介素-6（,IL,-,6,）基因表达水平，并采用Western blot法检测Mettl3、Fto蛋白表达。,结果,2,与正常组比较，模型组大鼠足肿胀体积、AI评分明显升高，,Mettl3,、,Mettl14,、,Fto,、,Alkbh5,、,Ythdf1,基因表达增加，,Ythdf2,基因表达降低，,TNF,-,α、IL,-,1β、IL,-,6,基因表达增加，Mettl3、Fto蛋白表达增加，差异均有统计学意义（,P,<,0.05）。与模型组比较，中药组和MTX组足肿胀体积、AI评分均随时间延长逐渐降低，,Mettl3,、,Mettl14,、,Fto,、,Alkbh5,、,Ythdf1,基因表达降低，,Ythdf2,基因表达增加，,TNF,-,α、IL,-,1β、IL,-,6,基因表达降低，Mettl3、Fto蛋白表达降低，差异均有统计学意义（,P,<,0.05）。与MTX组比较，中药组,Mettl3,、,Mettl14,、,Fto,、,Alkbh5,、,Ythdf1,基因表达降低，,Ythdf2,基因表达增加，,TNF,-,α、IL,-,1β、IL,-,6,基因表达降低，Mettl3、Fto蛋白表达降低，差异均有统计学意义（,P,<,0.05）。,结论,2,中药温化蠲痹方可能通过影响m6A甲基化来发挥抗炎作用，从而对CIA起到治疗效果。
Abstract
Objective,2,To study the effects of Wenhua Juanbi Recipe （WJR） on inflammation and m6A methylation in rats with collagen-induced arthritis （CIA）.,Methods,2,Fifty female Wistar rats were randomly divided into two groups： a normal group （,n,=10） and a model group （,n,=40）. CIA model was established by intracaudal multi-point injection of emulsifier. The model was evaluated by volumetric method （drainage volume） and arthritis index （AI） scoring method to assess the degree of toe swelling and joint inflammation， and the model with toe swelling,>, 1.6 mL and AI score≥4 was considered as successful. Thirty successfully modeled CIA rats were randomly divided into a model group （,n,=10）， a WJR group （TCM group， ,n,=10） and a MTX group （,n,=10）. The TCM group was administered with WJR at a dose of 22.9 g·kg,-1,·d,-1,； and the MTX group was given methotrexate suspension （MTX） at a dose of 0.78 mg·kg,-1, once a week. The normal group and the CIA group were given equal amounts of 0.9% NaCl solution once a day. The synovial membrane of the knee of rats was taken from each group after 30 days of treatment. The synovial pathology was examined by HE staining. The gene expressions of ,Mettl3,， ,Mettl14,， ,Fto,， ,Alkbh5,， ,Ythdf1, and ,Ythdf2 ,and the expression levels of joint inflammatory factors ,TNF,-,α,， ,IL,-,1β, and ,IL,-,6 ,genes in synovial membrane were detected by real-time PCR. Western blot was used to detect the expressions of Mettl3 and Fto proteins.,Results,2,Compared with the condition in the normal group， the toe swelling degree and AI score of rats in the model group increased significantly， and in the model group the expressions of ,Mettl3,， ,Mettl14,， ,Fto,， ,Alkbh5, and ,Ythdf1, genes increased， the expression of ,Ythdf2 ,gene decreased， the expressions of ,TNF,-,α,， ,IL,-,1β, and ,IL,-,6 ,genes increased， and the expressions of Mettl3 and Fto proteins increased （,P,<,0.05）. Compared with the condition in the model group， the toe swelling degree and AI score of rats in the WJR group and the MTX group decreased gradually with time， and in the WJR group and the MTX group the expressions of ,Mettl3,， ,Mettl14,， ,Fto,， ,Alkbh5, and ,Ythdf1, decreased， the expression of ,Ythdf2 ,increased， the expressions of ,TNF,-,α,， ,IL,-,1β, and ,IL,-,6 ,genes decreased， and the expressions of Mettl3 and Fto proteins decreased （,P,<,0.05）. Compared with the condition in the MTX group， the expressions of ,Mettl3,， ,Mettl14,， ,Fto,， ,Alkbh5, and ,Ythdf1, decreased， the expression of ,Ythdf2, gene increased， the expressions of ,TNF,-,α,， ,IL,-,1β, and ,IL,-,6, genes decreased， and the expressions of Mettl3 and Fto proteins decreased in the WJR group （,P,<,0.05）.,Conclusion,2,Wenhua Juanbi Recipe may have a therapeutic effect on CIA by affecting the m6A methylation to exert anti-inflammatory effects.
关键词
类风湿关节炎胶原诱导性关节炎温化蠲痹方N6-甲基腺苷大鼠模型中药研究
Keywords
rheumatoid arthritiscollagen induced arthritisWenhua Juanbi Recipem6Arat modeltraditional Chinese herbal medicine research
references
SCHERER H U， HÄUPL T， BURMESTER G R. The etiology of rheumatoid arthritis［J］. J Autoimmun， 2020， 110： 102400.
SMOLEN J S， ALETAHA D， MCINNES I B. Rheumatoid arthritis［J］. Lancet， 2016， 388（10055）： 2023-2038.
苏雨荷，王刚，文振华，等. 类风湿关节炎的发病机制及药物治疗研究进展［J］. 西北药学杂志，2021， 36（5）： 857-862.
HU Y， ZHAO X. Role of m6A in osteoporosis， arthritis and osteosarcoma［J］. Exp Ther Med， 2021， 22（3）： 926.
YANG Y， HSU P J， CHEN Y S， et al. Dynamic transcriptomic m6A decoration： writers， erasers， readers and functions in RNA metabolism［J］. Cell Res， 2018， 28（6）： 616-624.
WANG P， DOXTADER K A， NAM Y. Structural basis for cooperative function of Mettl3 and Mettl14 methyltransferases［J］. Mol Cell， 2016， 63 （2）： 306-317.
SHEN L， SONG C X， HE C， et al. Mechanism and function of oxidative reversal of DNA and RNA methylation［J］. Annu Rev Biochem， 2014， 83 ： 585-614.
SHI H， WEI J， HE C. Where， when， and how： context-dependent functions of RNA methylation writers， readers， and erasers［J］. Mol Cell， 2019， 74（4） ： 640-650.
JIANG H， CAO K， FAN C， et al. Transcriptome-wide high-throughput m6A sequencing of differential m6A methylation patterns in the human rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes cell line MH7A［J］. J Inflamm Res， 2021， 14： 575-586.
张艳萍，姜小帆. 薏苡仁汤加味结合温针灸治疗风寒湿痹型类风湿关节炎的临床效果及对患者炎性因子水平的影响［J］. 临床医学研究与实践，2020， 5（16）： 119-120.
刘喜德，刘敏，蔡龙，等．温化蠲痹方对类风湿关节炎患者外周血单个核细胞微小RNA-146a、DNA 甲基化转移酶表达的影响［J］. 中国中西医结合杂志，2018， 38（11）： 1320-1326．
GRIFFITHS M M， CANNON G W， CORSI T， et al. Collagen-induced arthritis in rats［J］. Methods Mol Med， 2007， 136： 201-214.
黄梦婷，郑琳琳，刘喜德. 温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞miRNA-146a、TRAF6、IRAK1基因表达的影响［J］. 中国中西医结合杂志，2021， 41（4）： 487-493.
徐叔云，卞如濂，陈修. 药理实验方法学［M］. 北京：人民卫生出版社，2003： 468.
赵继荣，杨文通，陈文，等. 威灵仙有效化学成分及镇痛机制研究进展［J/OL］.中华中医药学刊，2022［2022-07-29］.http：//kns.cnki.net/kcms/detail/21.1546.R.20220118.1022.002.htmlhttp://kns.cnki.net/kcms/detail/21.1546.R.20220118.1022.002.html.
严宝飞，段金廒，张景正，等. 忍冬藤提取物诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及机制研究［J］.中草药，2021， 52（13）： 3923-3932.
宋献美，李兵杰，张艳燕，等. 防风石油醚提取物对胶原诱导型关节炎大鼠P38 MAPK磷酸化和AQP-1表达的影响［J］. 中药药理与临床，2021， 37（5）： 80-85.
杨雪，赵福兰，王谦，等. 白芷外敷联合常规药物治疗类风湿关节炎临床效果分析［J］. 北方药学，2018， 15（8）： 38-39.
邸莎，安学冬，赵林华. 薏苡仁的临床应用及其用量探究［J］. 吉林中医药，2019， 39（12）： 1594-1597.
OSPELT C， GAY S， KLEIN K. Epigenetics in the pathogenesis of RA［J］. Semin Immunopathol， 2017， 39（4）： 409-419.
万磊，刘健，黄传兵，等. m6A甲基化修饰在类风湿关节炎发生发展中的作用［J］. 中医药临床杂志，2022， 34（2）： 368-372.
ZHANG X， LI X， JIA H， et al. The m6A methyltransferase METTL3 modifies PGC-1α mRNA promoting mitochondrial dysfunction and oxLDL-induced inflammation in monocytes［J］. J Biol Chem， 2021， 297（3）： 101058.
WANG J， YAN S， LU H， et al. METTL3 attenuates LPS-induced inflammatory response in macrophages via NF-κB signaling pathway［J］. Mediators Inflamm， 2019， 2019： 3120391.
SHI W， ZHENG Y， LUO S， et al. METTL3 promotes activation and inflammation of FLSs through the NF-κB signaling pathway in rheumatoid arthritis［J］. Front Med （Lausanne）， 2021， 8： 607585.
SUN Z， WANG H， WANG Y， et al. MiR-103-3p targets the m6A methyltransferase METTL14 to inhibit osteoblastic bone formation［J］. Aging Cell， 2021， 20（2）： e13298.
LUO J， WANG F， SUN F， et al. Targeted inhibition of FTO demethylase protects mice against LPS-induced septic shock by suppressing NLRP3 inflammasome［J］. Front Immunol， 2021， 12： 663295.
HSU P J， ZHU Y， MA H， et al. Ythdc2 is an N6-methyladenosine binding protein that regulates mammalian spermatogenesis［J］. Cell Res， 2017， 27（9）： 1115-1127.
黎琮南，李毅成，杨渊. m6A RNA甲基化在骨骼疾病中的作用［J］. 中国生物化学与分子生物学报，2020， 36（11）： 1303-1311.
0
浏览量
152
下载量
0
CSCD
0
CNKI被引量
- 网络PDF下载
- Meta-XML下载
- BibTeX下载
- Endnote下载
- RefMan 下载
- NoteExpress下载
- NoteFirst下载
关联资源
相关文章
相关作者
相关机构
- 技术支持由北京北大方正电子有限公司提供 沪ICP备13044091号
沪公网安备 31011502015228号 - 本系统建议在Chrome、 IE9+ 以上版本浏览器阅读本站内容，360浏览器请切换至极速模式
- Cookies帮助我们提供服务并提供个性化体验。使用本网站，即表示您同意我们使用Cookies
- 总访问量：70551 今日访问量：32