Main active components of Cinobufacini inhibit progression of hepatocellular carcinoma by activating cGAS⁃STING signaling pathway in macrophages

YU Shihan; ZHANG Xuemei; SHI Jia; ZHENG Wenlan; ZHENG Liming; LIU Hao; FENG Hai; YU Zhuo

doi:10.16305/j.1007-1334.2026.z20250506001

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Main active components of Cinobufacini inhibit progression of hepatocellular carcinoma by activating cGAS⁃STING signaling pathway in macrophages

更新时间：2026-01-06

- Main active components of Cinobufacini inhibit progression of hepatocellular carcinoma by activating cGAS⁃STING signaling pathway in macrophages
- Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine Vol. 60, Issue 1, Pages: 82-91(2026)
- 作者机构：
  
  1.上海中医药大学附属曙光医院疫病研究所，上海市中医临床重点实验室（上海 201203）
  2.上海中医药大学附属曙光医院肝病科（上海 201203）
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.16305/j.1007-1334.2026.z20250506001
  CLC：
- Received：06 May 2025，
  
  Published：10 January 2026
- 稿件说明：
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俞诗涵,张雪梅,石佳,等.华蟾素的主要活性成分通过激活巨噬细胞cGAS⁃STING信号通路抑制肝癌进展[J].上海中医药杂志,2026,60(1):82-91.

YU Shihan,ZHANG Xuemei,SHI Jia,et al.Main active components of Cinobufacini inhibit progression of hepatocellular carcinoma by activating cGAS⁃STING signaling pathway in macrophages[J].Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine,2026,60(1):82-91.
俞诗涵,张雪梅,石佳,等.华蟾素的主要活性成分通过激活巨噬细胞cGAS⁃STING信号通路抑制肝癌进展[J].上海中医药杂志,2026,60(1):82-91. DOI： 10.16305/j.1007-1334.2026.z20250506001.

YU Shihan,ZHANG Xuemei,SHI Jia,et al.Main active components of Cinobufacini inhibit progression of hepatocellular carcinoma by activating cGAS⁃STING signaling pathway in macrophages[J].Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine,2026,60(1):82-91. DOI： 10.16305/j.1007-1334.2026.z20250506001.

摘要

目的

通过体内外模型阐明华蟾素主要活性成分——蟾毒灵、华蟾毒精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵和脂蟾蜍配基的抗肝癌效应及其免疫调控机制。

方法

①体外实验：使用人Huh7和小鼠Hepa1-6肝癌细胞株，采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测药物对细胞活力的影响，DNA损伤及γ-组蛋白H2A变体X（γ-H2AX）表达运用DNA定量试剂盒、彗星实验、免疫荧光及Western blot进行检测。通过建立肿瘤细胞（Huh7、Hepa1-6）上清液-巨噬细胞（人THP-1、小鼠RAW264.7）共培养体系，采用Western blot、酶联免疫吸附分析（ELISA）试剂盒检测环磷酸鸟苷-腺苷合成酶（cGAS）-干扰素基因刺激蛋白（STING）信号通路蛋白表达及下游细胞因子的水平。②体内实验：构建Hepa1-6原位肝癌模型，用单个组分（

=5）处理小鼠，验证华蟾素的主要活性成分通过激活cGAS-STING信号通路抑制肿瘤生长。

结果

①体外实验证实蟾毒灵、华蟾毒精、蟾毒它灵和华蟾毒它灵能够显著诱导肝癌细胞DNA损伤，促进γ-H2AX的表达，激活巨噬细胞内cGAS-STING信号通路，增强β干扰素（IFN-β）分泌。②体内实验证实这些成分能激活cGAS-STING信号通路，分泌IFN-β，显著抑制肿瘤生长。

结论

蟾毒灵、华蟾毒精、蟾毒它灵和华蟾毒它灵通过激活cGAS-STING信号通路抑制肿瘤生长的免疫调节机制，为肝癌的免疫治疗提供了一种有效的治疗策略。

Abstract

Objective

To elucidate the anti-hepatocellular carcinoma （HCC） effect and immunoregulatory mechanism of the main active components of Cinobufacini （Huachansu）， including bufalin， cinobufagin， bufotalin， cinobufotalin and resibufogenin， using

in vitro

and

in vivo

models.

Methods

①

In vitro

： Human Huh7 and mouse Hepa1-6 HCC cells were treated with individual components. Cell viability was assessed using the Cell Counting Kit-8（CCK-8） assay. DNA damage and γ-histone H2A variant X （γ- H2AX） expression were analyzed using DNA quantification kits， comet assays， immunofluorescence， and Western blot. A co-culture system of tumor cell （Huh7， Hepa1-6） supernatant and macrophages （human THP-1， mouse RAW264.7） was established. Western blot and enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） were used to measure protein expression of the cyclic GMP-AMP synthase （cGAS）- stimulator of interferon genes （STING） signaling pathway and the levels of downstream cytokines. ②

In vivo

： An orthotopic Hepa1-6 HCC model was established in C57BL/6 mice. Mice were treated with individual components （

=5） to verify valid

ate tumor suppression via the cGAS-STING pathway.

Results

①

In vitro：

Bufalin， cinobufagin， bufotalin and cinobufotalin significantly induced DNA damage， promoted γ-H2AX expression， activated the cGAS-STING pathway in macrophages and enhanced interferon-β （IFN-β） secretion. ②

In vivo

： These components activated the cGAS-STING pathway， secreted IFN‑β， and significantly inhibited tumor growth.

Conclusion

Bufalin， cinobufagin， bufotalin， and cinobufotalin inhibit HCC growth by activating the cGAS-STING signaling pathway through immunoregulation， supporting their potential as immunotherapeutic strategies.

关键词

Keywords

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